圖 ! !"#牛溶漿機(jī)胰核糖核酸酶分子的變性與復(fù)性 ##變性的蛋白質(zhì)不一定沉淀，沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性，但變性蛋白質(zhì)容易沉淀，凝固的蛋白質(zhì)均已變性，而且不再溶解。 ##（四）蛋白質(zhì)的光譜吸收與呈色反應(yīng) # #$%蛋白質(zhì)的光譜吸收 ##組成蛋白質(zhì)的肽鍵和側(cè)鏈上的某些基團(tuán)對一定波長的光有其特征性的吸收峰。色氨酸殘基和酪氨酸殘基含有共軛雙鍵，使蛋白質(zhì)在波長 !&’ ()紫外光下有最大吸收峰。 !&’ ()處吸光度的測定常用于蛋白質(zhì)的定量。 # #!%蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng) ##蛋白質(zhì)分子中的肽鍵和許多側(cè)鏈基團(tuán)均可與一些特定的試劑發(fā)生呈色反應(yīng)。這些呈色反應(yīng)常用于蛋白質(zhì)的定性與定量。二縮脲反應(yīng)（*+,-./ /.0/）的原理是，在堿性溶液中， 1,! 2可與蛋白質(zhì)分子中肽鍵形成紫紅色絡(luò)合物。二縮脲反應(yīng)對蛋白質(zhì)的檢出量為 $ 3!’ )4。酚試劑呈色反應(yīng)是最為常用的蛋白質(zhì)定量方法（又稱 567-8法）。此法除蛋白質(zhì)分子中肽鍵與堿性銅發(fā)生二縮脲反應(yīng)外，蛋白質(zhì)分子中的色氨酸與酪氨酸殘基還將試劑中的磷鎢酸和磷鉬酸鹽還原生成藍(lán)色化合物（鉬藍(lán)）。酚試劑法很靈敏，可檢測出 9 !4的蛋白質(zhì)。二、蛋白質(zhì)的提取與純化原理 ##破碎組織和細(xì)胞，將蛋白質(zhì)溶解于溶液中的過程稱為蛋白質(zhì)的提取，將溶
液中的蛋白質(zhì)相互分離而取得單一蛋白質(zhì)組分的過程稱為蛋白質(zhì)的純化。蛋白質(zhì)的各種理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)是其提取與純化的依據(jù)。目前尚無單一的方法可純化出所有的蛋白質(zhì)，每一蛋白質(zhì)的純化過程常是許多方法綜合應(yīng)用的系列過程。純化蛋白質(zhì)的常用方法列于表 !&。 ##（一）改變蛋白質(zhì)的溶解度 ##通過改變蛋白質(zhì)的溶解度沉淀蛋白質(zhì)的常用方法有鹽析和有機(jī)溶劑沉淀。此外，還有調(diào)節(jié) :;和改變溫度等方法。 第二章 #蛋#白#質(zhì)"!表 ! "#蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與常用的純化方法蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)常用的純化方法分子質(zhì)量與體積離心凝膠過濾透析、超濾電荷離子交換層析電泳等電聚焦溶解度調(diào)整 !"調(diào)整離子強(qiáng)度降低介電常數(shù)特異結(jié)合部位親和層析親和洗脫其他性質(zhì)吸附層析液相層析氣相層析 ##鹽析（$%&’()* +,’）是用高濃度的中性鹽將蛋白質(zhì)從溶液中析出的方法。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉和氯化鈉等。高濃度的中性鹽可以奪取蛋白質(zhì)周圍的水化膜，破壞蛋白質(zhì)在水溶液中的穩(wěn)定性。對不同的蛋白質(zhì)進(jìn)行鹽析時(shí)，需要采用不同的鹽濃度和不同的 !"。鹽析時(shí)的 !"多選擇在蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)附近。例如，在 !"-. /附近時(shí)，血清清蛋白溶于半飽和硫酸銨中，球蛋白沉淀下來；當(dāng)硫酸銨達(dá)到飽和濃度時(shí)，清蛋白也沉淀出來。 ##與水互溶的有機(jī)溶劑（丙酮、正丁醇、乙醇和甲醇等）可以顯著降低溶液的介電常數(shù)，使蛋白質(zhì)分子之間相互吸引而沉淀。有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)應(yīng)在低溫下進(jìn)行，低溫不僅降低蛋白質(zhì)的溶解度，而且還可以減少蛋白質(zhì)變性的機(jī)會(huì)。 ##（二）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的分離方法 ##各種蛋白質(zhì)分子具有不同的相對分子質(zhì)量和形狀，可采用離心、超濾和凝膠過濾等技術(shù)將其分離。 # #0.離心 ##離心（12)’3(4,*%’(+)）分離是利用機(jī)械的快速旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，將不同密度的物質(zhì)分離開來的方法。按應(yīng)用
實(shí)際，離心機(jī)可分為制備型離心機(jī)（!32!%3%’(52 $1%&2 12)’3(4,*2）和分析型離心機(jī)（%)%&6’(1%& 12)7 ’3(4,*2）。 ##制備型離心用于大量樣品的分離。例如，差速離心（8(44232)’(%& 12)’3(4,*%’(+)）是對含兩種以上大小不同的待分離物質(zhì)的混合液，以不同離心速率分步驟離心沉淀，使之相互分離的離心方法。圖 9 9-顯示利用差速離心法分離不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。由圖可見，不同的亞細(xì)胞組分可以用不同的離心力，分級的逐步沉淀分離出來。 ##分析型超速離心可用來測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量。蛋白質(zhì)在高達(dá) :/ ///; !的離心力下，可在溶液中逐漸沉降，直到溶液對其浮力（<,+6%)’ 4+312）與離心力相等時(shí)便停止沉降。已知，在離心過程中作用于溶質(zhì)分子上的離心力為 !9 "，其中 !是離心角速率， "是溶質(zhì)離開中心軸的距離。當(dāng)溶質(zhì)在離心力場中運(yùn)動(dòng)達(dá)到離心穩(wěn)態(tài)時(shí)，溶質(zhì)分子所受的離心力與反方向的阻力（摩擦力和黏滯阻力）相平衡，此時(shí)溶質(zhì)便以恒速沉降。在單位離心力場下，溶質(zhì)分子的沉降速率為： 8" !9 "·# = 8$ "!第一篇(生物分子的結(jié)構(gòu)與功能勻漿 $$$! """ # !，$ %&’ $$$$$$%%%%%%%%%%%%%## (沉淀上清 ) """ # !，!" %&’ $$$$$$（未破壞的%%%%%%%%$$$%%%%真核細(xì)胞） ## (沉淀上清
